§ JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA
(FUNDAMENTO).
Las pruebas de mezclas se realizan cuando alguno de los tiempo determinados
en el plasma problema (generalmente el TTPA) está alargado. Para llevarlas a
cabo se mezclan, a partes iguales, el plasma problema y un plasma o un suero
(según el tipo de prueba que se pretende realizar) que se sabe que es normal.
Tras lo cual, se incuba la mezcla a 37 ºC durante 60 minutos.
Si los tiempos determinados en la mezcla se corrigen, falta algún factor en
el plasma problema y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario
de factores contenidos en el plasma o en el suero normales.
La prueba de mezcla con plasma normal no se practica, generalmente, cuando
en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado. En esta
circunstancia, se supones que el paciente sufre un déficit de algún factor de
la vía intrínseca y, en concreto, de los factores VIII, IX, XI o XII.
Para llevarla a cabo, se mezcla, a partes iguales, el PPP problema con PPP
normal, y se repite la determinación del TTPA, pero no en el PPP problema puro,
sino en la mezcla preparada. Después se incuba la mezcla a 37 ºC durante 60
minutos.
Si el TTPA determinado en la mezcla se corrige, falta, en el plasma
problema, alguno de los factores de la vía intrínseca que, sin embargo, si está
presente en el PPP normal.
Si el TTPA de la mezcla no se corrige con respecto al del PPP problema
puro, el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos como, por ejemplo, a la
actuación de sustancias inhibidoras de la coagulación.
§ IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES
EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es un plasma pobre en plaquetas (PPP),
correctamente preparado y con un TTPA claramente anómalo, alargado.
A partir de este, hay que preparar una dilución a 1/2 con el pool de
plasmas normales o con el plasma control normal. Se puede hacer de la siguiente
manera:
PPP anómalo
|
100 µl
|
Pool de plasmas normales o Plasma
control normal.
|
100 µl
|
Dilución
|
1/2
|
La dilución de la muestra se incuba durante 15 minutos
§ MATERIAL UTILIZADO.
MATERIAL ADICIONAL
-
Gradilla.
-
Cubetas
de coagulómetro.
-
Varitas
de acero.
-
Rotulador
de vidrio.
-
Pipeta
automática de 100 µl.
-
Puntas
de pipeta.
-
Coagulómetro.
-
Tubos
de ensayo de plástico.
REACTIVOS
-
Una
solución de cloruro cálcico 0,025 M
-
Una
cefalina activada con ácido elágico.
-
Un
pool de plasmas normales o un plasma control normal.
§ SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1. En
una cubeta, preparar 50 µl de plasma del paciente y 50 µl de plasma anormal.
2. Atemperar
a 37 ºC durante unos 15 minutos.
3. Después,
se añaden 100 µl de R1 del TTPA y se pasa al medidor del
coagulómetro.
4. Se
pulsa reset y ok : PTT T ...:300.
Tenemos unos 20 segundo para que se inicie.
5. Cuando
el contador ya está a 0, se echan 100 µl de R2.
6. Automáticamente
se inica el contador y se para cuando se forma el coágulo.
§ DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON
EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.
El TTPA es el tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 hasta la
formación del coágulo de fibrina.
Los valores normales del TTPA están comprendidos, habitualmente, entre los
30 y los 40 segundos. Un tiempo superior a estos valores se considera alargado.
Como el TTPA de la dilución de la muestra se determina dos veces, se
calcula la cifra media de esta pareja de valores, cuyo valor es el resultado
final de la determinación.
Si el TP es normal y el TTPA está alargado, el enfermo, probablemente,
padecerá un trastorno de la vía intrínseca.
En este caso, se debe repetir la determinación del TTPA, pero incubando la
mezcla de plasma y cefalina activada durante 15 minutos. Si con este cambio se
corrige el alargamiento del TTPA, es decir, se torna normal,probablemente, hay
un déficit de PK.
Cuando tras aumentar el tiempo de incubación, no se corrige el TTPA, tiene
que hacerse una prueba de mezcla con plasma normal.
Si tras la mezcla con plasma norma, el TTPA se corrige, es decir, deja de
ser alargado, falta algún factor de la vía intrínseca (Factor VIII, IX, XI o
XII) en la muestra y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario
de factores contenidos en el plasma normal.
Si, por el contrario, tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el
TTPA, se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la
coagulación, como heparina, PDF, inhibidor tipo lupus, etc
§ APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.
Asegurarse de que el coagulómetro está bien calibrado al programa que
necesitamos (PTT) y realizar la lectura de la muestra dos veces y dar, como
resultado final, la media.
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
CONTROL NORMAL REF: 1709104
CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se
debe revisar el instrumento, los reactivos o la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
§ NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES
ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio, y l pelo recogido si se tiene largo.
2. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
3. Uso
correcto del coagulómetro.
4. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
§ CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.
Los materiales utilizados, se
pueden lavar con normalidad en el fregador.
§ OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
Las principales posibilidades
diagnósticas ante un enfermo con TTPA prolongado no sospechado, son la
presencia de un anticoagulante circulante inespecífico, un déficit de factor
XI, un déficit de factor XII o un déficit de factor VIII asociado a la
enfermedad de von Willebrand. Una correcta historia clínica dirigida hacia la posible
presencia de coagulopatía, y una básica prueba de laboratorio (mezcla de plasma
normal con plasma problema) permite orientar la orientación, por ejemplo, ante
una cirugía.
Hoja de trabajo
Hoja de trabajo
1º ¿Cuándo debe hacerse una prueba
de mezcla con plasma normal?
Cuando hay TP normal y TTPA alargado
2º ¿Si tras la mezcla con plasma
normal, no se corrige el TTPA, ¿qué se debe investigar?
Se deben investigar los factores inhibidores de la coagulación
