martes, 9 de junio de 2015

Determinación del grupo Rh en porta (05-05-15)



JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).
Al igual que en el caso del grupo AB0, podemos determinar el grupo Rh tanto en porta como en tubo. Es importante comprobar siempre los resultados obtenidos, bien por la realización de ambas técnicas, o bien por ser dos técnicos los que las realicen en paralelo.
En el caso de la prueba en porta, hay que señalar que la aglutinación se favorece con el calor, por lo que es necesario disponer de un visualizados que permita tanto calentar el porta como observar mejor el resultado de la reacción.
La técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D.
En el caso de que los hematíes contengan el antígeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista.

IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es de sangre capilar.
MATERIAL UTILIZADO.
MATERIAL ADICIONAL


-   Papel de filtro.
-   Lanceta.
-   Algodón.
-   Bata y guantes
-   Portaobjetos.
-   Pipetas Pasteur
-   Rotulador de vidrio.
-   Palillos.
-   Visualizador luminoso.



REACTIVOS
·         Suero anti-D
·         Albúmina bovina al 30%
SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).

1.      Dividimos el portaobjetos en dos secciones con el rotulador y marcamos con la letra S (suero) y con la letra A (Albúmina).
2.      En la sección de la S ponemos dos gotas del suero anti-D y en la sección de la A ponemos dos gotas de albúmina bovina al 30%.
3.      A continuación, ponemos una gota de sangre en cada una de las secciones y mezclamos con los palillos.
4.      Ponemos la lámpara y en ella colocamos el porta, balanceándolo para favorecer la mezcla de la sangre y los reactivos.


DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.
Esperamos 2 minutos antes de dar el resultado de la prueba.
·         Aglutinación positiva: aparición de grumos rojos sobre un fondo claro. No deben confundirse con pequeños coágulos de fibrina presentes en la muestra.
·         Aglutinación negativa: la mezcla da lugar a una suspensión homogénea de los hematíes. La mezcla de sangre con albúmina bovina debe dar siempre aglutinación negativa. En caso de no ser así, no podemos informar del resultado de la prueba.

Los resultados se interpretan según el siguiente cuadro:

Sección S
Sección A
Interpretación

+
-
Rh positivo
Aglutinación positiva
-
-
Rh negativo
Aglutinación negativa
+
+
¿?
No se puede interpretar.

El resultado que he obtenido es aglutinación en la sección S por lo tanto el Rh es positivo

Este es el gráfico de los grupos Rh de la clase:

APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.
Para poder dar un resultado correcto, se debe comprobar que la sección A (albúmina) no aglutina, ya que esta no puede aglutinar nunca.
Se debe realizar la observación en la lámpara o visualizador luminoso, previamente calentado, ya que el calor favorece la aglutinación de los hematíes.
NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.
2.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.
3.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.
4.      Uso correcto del visualizador luminoso.
5.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.
6.      Desechar la lanceta en el contenedor amarillo destinado a objetos punzantes y el algodón en el contenedor de orgánicos
CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.
Los portaobjetos utilizados, se pueden lavar en el fregador y se deben guardar los reactivos bien cerrados en el frigorífico.
OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
La determinación del factor Rh sirve para determinar la presencia o ausencia del antígeno D en una muestra de sangre.
La presencia de este antígeno se denomina Rh positivo y la ausencia Rh negativo. 
El facto Rh es una proteína integral de la membrana aglutinógena que está presente en todas las células, se encuentra en los glóbulos rojos de más del 85% de la población en todo el mundo. 
El antígeno D es altamente inmunogénico e induce una respuesta inmune en muchas personas Rh- cuando reciben una transfusión con sangre Rh+. Por esta razón, en muchos países se realizan controles rutinarios en los donantes de sangre y los individuos que se van a someter a una transfusión, de forma que pacientes Rh- reciben exclusivamente productos D negativo.
Hoja de trabajo
1º ¿ Qué tipo de muestra empleamos en esta técnica?
Se ha utilizado sangre capilar.
2º ¿Para qué se utiliza el visualizador?
El visualizador luminoso se utiliza ya que el calor que desprende favorece la aglutinación de los hematíes y para favorecer la visualización del muestra.
3º ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones?
La presencia de pequeños coágulos de fibrina presentes en la muestra pueden dar lugar a falsas aglutinaciones
4º. ¿Qué ocurre si aglutina la sección A?
Si aglutina la sección A, los resultados no se pueden interpretar ya que la albúmina nunca puede aglutinar, es decir, siempre ha de dar una aglutinación negativa.

Determinación sérica del grupo AB0 (27-04-15)



Justificación de la técnica y metodología utilizada

El suero de un individuo solo debe contener Ac frente a los Ag que no están presentes en sus propios hematíes. Por ello, al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentados a eritrocitos con Ag distintos a los de sus propios hematíes
.
Identificación de la muestra utilizada y de los controles efectuados

La muestra que se utiliza en esta práctica es suero, aunque nosotros hemos utilizado plasma

Material utilizado

Material
·         - Tubos de ensayo
·          -   Pipetas Pasteur
·          -   Vasos de precipitados
·          - Centrifuga
- Reactivos
·          -   Suero fisiológico

Secuenciación y procedimiento seguido

1        1ºSe centrifuga la sangre y se le retira el plasma 

2        2ºEl plasma debe ser inactivado a 56 ºC durante 10 min en el caso de utilizar plasma en la practica

3        3ºSe hacen tres lavados de hematíes a esa sangre que ha quedado en el tubo después de centrifugar y se hace una suspensión de hematíes al 5%, para hacer la suspensión se cogen 250 microlitros de hematíes lavados y se echan en un tubo con 4,75 ml de suero fisiológico.

4    4º Se hace una suspensión de hematíes con cada grupo sanguíneo

5    5ºSe rotulan 5 tubos de centrifuga (A1, A2, B, 0 Y C)

6ºSe le añade a cada uno de esos tubos dos gotas de plasma problema y 1 gota de sus suspensión correspondiente. El tubo C lleva suspensión de sangre problema.

Se agitan suavemente y se centrifugan 1 min a 1000 rpm

8        8ºSe observan 

Descripción y registro de los resultados obtenidos

El grupo eritrocitario que se asignara, según los resultados obtenidos, se puede ver en el siguiente cuadro:




Tubo A1
Tubo A2
Tubo B
Tubo 0
Tubo C
Ac  presentes en el suero
Grupo eritrocitario
      -
      -
      +
     -
       -
 Anti - B
     A1
    - o + *
      -
      +
-           
       -
Anti – B y Anti – A1*
      A2
      +
      +
      -
-           
       -
Anti – A
       B
      +
      +
      +
     -
       -
Anti – A y Anti – B
       0
       -
      -
      -
     -
       -
Ninguno
     A1B
   - O +
      -
      -
     -
       -
Ninguno o Anti – A1
     A2B
      +
      +
      +
     +
       +
 Anticuerpos
Ininterpretable

+ = Aglutinación     
- = No Aglutinación
* = Este Anti A1 se encuentra solo en un 2% de los individuos A2



El resultado que he obtenido es el siguiente:

Tubo A1 –> Aglutinación

Tubo A2 --> Aglutinación

Tubo B --> Aglutinación

Tubo 0 --> No aglutinación

Tubo C --> No aglutinación

Por lo tanto según la tabla el resultado corresponde al grupo sanguíneo 0

Aplicación del control de calidad 

Para poder realizar un estudio correcto en esta práctica, los hematíes han de estar bien lavados. En caso de estar el sobrenadante coloreado, significa que ha habido hemólisis, por lo que debemos de comenzar de nuevo con el lavado de hematíes.
Para utilizar correctamente la centrífuga, los tubos a utilizar han de ser todos del mismo tamaño y en número par, para poder equilibrar la centrífuga.
Seguir correctamente las indicaciones de utilización de la centrífuga marcados en la práctica.


Normas de prevención de riesgos laborales
               1.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.
               2.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.
               3.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.
               4.      Uso correcto de la centrifugadora.
               5.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.

Cuidado del medio ambiente

Lavar bien los tubos

Observaciones, comentarios y conclusiones

Es difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso de los recién nacidos, ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados aun. También encontramos dificultades en los pacientes con gammaglobulinemia, ya que carecen de anticuerpos, y en aquellos que poseen unos anticuerpos específicos o inespecíficos capaces de reaccionar con los antígenos del grupo AB0

Hoja de trabajo 

1º ¿Qué son los hematíes tipados?

Son los hematies lavado con suero fisiologico

2º ¿A que dilución empleamos los hematíes del paciente?

Empleamos una dilución del 5%

3º ¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica?

Suero obtenido mediante coagulación de la sangre

4º ¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?

Cuando el tubo C presenta aglutinación se deberia repetir las pruebas con otro lavado de hematies ya que el tubo C debe ser un control negativo