§ JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA
(FUNDAMENTO).
El TTPA, es la prueba más sensible para evaluar la vía intrínseca de la
coagulación. Consiste en activar el plasma por contacto con superficies
cargadas negativamente (caolín, sílica, etc.). En esta prueba se fija la
concentración de fosfolípidos presentes en la reacción, mediante el agregado de
cefalina (tromboplastina parcial). La activación por contacto se ve favorecida
por el agregado de caolín (sustancia inerte, con cargas negativas) que aumenta
la superficie de contacto.
El TTPA es el tiempo que tarda en coagular un plasma pobre en proteínas y
en presencia de f3p.
La recalcificación del PPP se realiza mediante la adición de una solución
de cloruro cálcico (CaCl2).
El sustituto del f3p, consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida
a partir de cerebros de conejos, que recibe el nombre de cefalina.
En esta prueba, también se añade con la cefalina una sustancia activadora
de los factores de contacto, como pueden ser el caolín, el polvo de vidrio, el
sílice, el celite y el ácido elágico.
§ IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES
EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es plasma pobre en plaquetas (PPP)
§ MATERIAL UTILIZADO.
Coagulómetro
MATERIAL ADICIONAL
-
Gradilla.
-
Cubetas
de coagulómetro.
-
Barritas
de acero.
-
Pinzas.
-
Rotulador
de vidrio.
-
Pipeta
automática de 100µ.
-
Puntas
de pipetas.
-
Tubos
de ensayo.
-
Un
baño de agua
-
Coagulómetro.
REACTIVOS
·
R1:
Activador: Ácido alégico.
·
R2:
Iniciador: Cloruro cálcico (CaCl2) 0,02 M.
·
Pool
de plasmas normales o plasma control normal.
§ SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1. Atemperar
los reactivos y la muestra a temperatura ambiente.
2. Mezclar
bien los reactivos sin agitarlos.
3. Introducir
una barrita de acero en cada cubeta.
4. Pipetear,
en dos cubetas de coagulómetro, 100 µl de PPP y 100 µl de R1 (ácido elágico)en
una cubeta y 100 µl en la otra cubeta.
5. Mezclar
e incubar 5 minutos a 37º en el coagulómetro.
6. Cuando
quede un minuto, atemperar el cloruro cálcico (Previamente trasvasada a una
cubeta la cantidad necesaria) en el coagulómetro.
7. Cuando
pite, con la cubeta en el hueco medidor del coagulómetro, pipeteamos 100 µl de
R2 (Cloruro cálcico) y anotamos la medición.
8. Se
procede de igual manera con las cubetas restantes (los dos de control y la otra
de PPP del paciente.
§ DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON
EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.
El TTPA es el tiempo transcurrido desde la adición del CaCL2 hasta la
formación del coágulo de fibrina.
Lo más correcto es determinar 2 veces el TTPA de la muestra y del plasma
control y dar como resultado final la cifra media calculada a partir de cada pareja
de valores..
Los valores normales del TTPA están comprendidos, habitualmente, entre los
30 y 40 segundos. Un tiempo superior a estos valores se considera alargado.
También se considera anormal un TTPA de la muestra superior, en más de 8
segundos. Al del control.
Otra forma de expresar el resultado del TTPA es en forma de cociente o
proporción (ratio) entre el número de segundos que tarda en coagular el plasma
del paciente y el número de segundos que tarda en coagular un plasma control
normal. Cuanto más alto es este cociente, mayor es el déficit coagulatorio.
El TTPA se emplea, fundamentalmente, para detectar déficits de los factores
de la vía intrínseca de la coagulación y para el control de los tratamientos
con anticoagulantes y, en concreto, de las terapias con heparina.
Los resultados obtenidos han sido:
TTPA M: 35,8 sg
C: 45,8 sg
Ratio: TTPA paciente/TTPA control = 35,8 /45,8 = 0,78
El tiempo resultante de la prueba, se encuentra dentro de los valores
normales del TTPA, por lo que la vía intrínseca no tiene ningún déficits de sus
factores.
§ APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.
Es conveniente analizar, junto con las muestras, sueros de control
valorados.
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se
debe revisar el instrumento, los reactivos ola técnica.
No usar como anticoagulante oxalato sódico, EDTA o heparina.
§ NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES
ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio.
2. Llevar
el pelo recogido si se tiene largo.
3. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
4. Uso
correcto del baño de agua y el coagulómetro.
5. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
§ CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.
Al no tratarse de un producto
considerado como peligroso no está sujeto a la legislación sobre el transporte
ni etiquetado. Por tanto el material se puede lavar con normalidad, sin dejar
restos de detergente, en el fregador.
§ OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
El TTPA o tiempo de cefalina activada, mide el tiempo que tarda en coagular
una muestra de plasma del paciente con un reactivo que contiene fosfolípidos y
un activador de sílice que proporciona una superficie que participa en un
cambio conformacional del factor XII plasmático, lo que produce su activación.
El factor XIIa forma un complejo con otros dos componentes plasmáticos, el
cininógeno de alto peso molecular (factor Fitzgerald) y la precalicreína
(factor Fletcher). Estas tres glucoproteínas plasmáticas denominadas factores
de activación por contacto, inician la formación del coágulo in vitro, pero no
participan en la coagulación in vivo.
Las deficiencias de factores que causan resultados prolongados del TTPA son,
por orden de reacción, el XI, IX, VIII, X, V, protrombina y fibrinógeno, cuando
éste es inferior a 100 mg/dl. El TTPA también está prolongado en presencia de
anticoagulante lúpico, anticuerpo antifactor VIII y heparina no fraccionada.
Las deficiencias de los factores VII y XIII no tienen efecto sobre el TTPA.
El TTPA se utiliza para el estudio
de los factores de la vía intrínseca de la coagulación, monitorización del
tratamiento con heparina no fraccionada o presencia de anticoagulante lúpico u
otros inhibidores.
Hoja de trabajo
Hoja de trabajo
1º ¿De dónde se obtiene el
sustituto de f3p?
Se obtiene a partir de cerebros de conejos..
2º ¿cómo se llama el sustituto del
f3p?
Recibe el nombre de cefalina
3º ¿Qué activadores de los
factores de contacto se pueden utilizar?
Se pueden utilizar el caolín, el polvo de vidrio, el sílice, el celite y
el ácido elágico.
4º. ¿Cuántos segundos debe superar
el TTPA de la muestra al de control para ser considerado anormal?
Debe superar los 8 segundos.
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