Determinación de la sideremia (22-01-15)

JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).

 El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma un complejo coloreado.
Transferrina (Fe³⁺)₂ + e^-_⎯⎯^{Ácido ascórbico}  2 Fe²⁺+ Transferrina Fe^{2+ FerroZine}  Complejo coloreado

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hierro en la muestra ensayada.
El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado.
El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropénica. Se encuentran niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas1,5,6.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
Suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematíes.
Estabilidad de la muestra: El hierro es estable de 7 días a 2-8ºC1. 

MATERIAL UTILIZADO.

REACTIVOS

R 1 Tampón:  Acetato pH 4,9100 mmol/L

R 2 Reductor: Ácido ascórbico 99,7%

R 3 Color  FerroZine 40 mmol/L

IRON CAL:  Patrón primario acuoso de Hierro 100 μg/dL

 MATERIAL ADICIONAL

- Espectrofotómetro o analizador

- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.

- Micropipetas y puntas

- Bata y guantes

- Rotulador.

- Papel del fieltro.

 SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).

1. Condiciones del ensayo:

-        Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 562 nm (530-590)

-        Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz

-        Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . 37ºC / 15- 25ºC

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Rotular 4 tubos de ensayo con las siglas BR (Blanco reactivo). P (PAtrón), BM (Blanco Muestra) y M (Muestra).

4. Pipetear en una cubeta:

	Blanco RT	Patrón	Blanco Muestra	Muestra
RT (mL)	1,0	1,0	1,0	1,0
R3 (gotas)	1	1	--	1
Agua destilada (μL)	200	--	--	--
Patrón (Nota2,3) (μL)	--	200	--	--
uestra (μL)	--	--	200	200

5. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente. 

6. Leer las absorbancias (A) del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.

7. Realizar los cálculos:

La muestra se resta al blanco muestra y lo que te de se divide entre el patron y se multiplica por 100

Factor de conversión: μg/dL x 0,179= μmol/L.

DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.

Con esta técnica analítica, los valores normales de la sideremia son los siguientes:

Hombres	65-175 μg/dL ≅ 11,6-31,3 μmol/L
Mujeres	40-150 μg/dL ≅ 7,16-26,85 μmol/L

Se observa una hiposideremia en la anemia ferropénica y en la anemia de las afecciones crónicas.

Se encuentra un aumento de la concentración de hierro sérico en todas las situaciones de sobrecarga de hierro, como la hemocromatosis idiopática y las anemias sideroblásticas.

Los resultados obtenidos en esta prueba son:

1ª Lectura:

Cero: 0,001

ABS: 0,277

2ª Lectura:

BRT: 0,001

Patrón: 0,096

Muestra: 0,047

Aplicamos la fórmula de antes y como resultado da 47,91 microgramos/dl de hierro

Tomando los valores de referencia, se puede deducir que:

1º Si la muestra es de hombre, está por debajo de lo normal, se observa una hiposideremia, por lo que puede haber anemia ferropénica o una anemia de las afecciones crónicas.

2º Si la muestra es de mujer, está más cercano al límite inferior, pero está dentro de los límites, por lo que no hay ninguna afección.

APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.

 Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:  SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).

Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el Patrón.

Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

 Desechar las muestras hemolizadas, ya que los hematíes contienen hierro y pueden dar falsos resultados positivos.

Se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso. Si se usa material de vidrio sumergirlo durante 6 h en ClH diluido (20%, v/v), enjuagar varias veces con agua destilada y secar antes de su uso.

 La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores séricos.

Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.

Los valores de referencia son altamente dependientes del método utilizado.

SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores.

 NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.

1.      Frente al espectrofotómetro:

-        No tocar el alojamiento de la fuente infrarroja.

-        No colocar nada encima.

-        Después de apagarlo, esperar 15 minutos antes de cambiar la muestra.

-        No bloquear los ventiladores o conductos de ventilación.

-        Para limpiarlo, desenchufarlo y utilizar y paño y jabón suaves. No tocar las superficies reflectoras.

2.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.

3.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.

4.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.

5.      Uso correcto de la centrifugadora.

6.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.

7.      Desechar la jeringuilla y la aguja usadas en la extracción de sangre en su contenedor correspondiente.

 CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.

Puesto que los reactivos de esta práctica son de poca cantidad, se pueden desechar por el fregador dejando correr el agua.

OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.

La sideremia representa el total del hierro sérico, ligado a las distintas proteínas. (En general, refleja el hierro fijado a transferrina).

La sideremia por sí sola, aporta muy poca información sobre el estado de hierro del organismo. Es la prueba más sujeta a errores ya que depende de variaciones circadianas y es muy sensible a cambios en la dieta, lo que puede suponer fluctuaciones de hasta un 30% de su valor. En conjunto es un parámetro muy poco específico para valorar un déficit o exceso de hierro.

Los valores del hierro sérico también se ven alterados por diversas patologías. La sideremia es baja en el déficit de hierro, pero también en todas aquellas situaciones que se acompañan de un bloqueo del hierro en el sistema mononuclear fagocítico, como inflamaciones crónicas o neoplasias avanzadas.

Por otra parte puede hallarse una sideremia elevada en los casos de sobrecarga férrica, pero también cuando existe algún trastorno en la utilización del hierro (anemias sideroblásticas y talasemias), en anemias hemolíticas, necrosis hepáticas o en el alcoholismo crónico.