§ JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA
(FUNDAMENTO).
El fibrinógeno plasmático puede ser cuantificado mediante diferentes
métodos. Sin embargo, actualmente se suelen utilizar aquellos que exploran sus
capacidades funcionales o antigénicas.
La determinación cronométrica de fibrinógeno, según el método de von
Clauss, se basa en la medición del tiempo que tarda un exceso de trombina en
degradar a fibrina el fibrinógeno presente en un PPP diluido y en formar el
coágulo.
El tiempo que tarda en originarse el coágulo de fibrina depende,
exclusivamente, de la cantidad inicial de fibrinógeno y es inversamente
proporcional a la concentración de éste en el plasma estudiado (fibrinogenemia).
En estas condiciones, el logaritmo del tiempo de coagulación está en
relación lineal con el logaritmo de la fibrinogenemia.
§ IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES
EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es de plasma citratado al 3,8%.
§ MATERIAL UTILIZADO.
MATERIAL ADICIONAL
-
Papel.
-
Bata.
-
Guantes.
-
Pipetas
automáticas.
-
Tubos
de ensayo.
-
Puntas
de pipetas.
-
Cubetas.
-
Gradilla.
-
Coagulómetro.
-
Varilla
de acero.
-
Cronómetro.
REACTIVOS
R1: Trombina bovina.
R2: Tampón Imidazol.
R3: Solución Caolín.
§ SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1. En
una cubeta se prepara 50 µl de muestra y 450 µl del tampón de imidazol (R2)
2. Después,
del paso 1, preparamos 200 µl de la dilución y 20 µl de R3.
3. Atemperar
a 37 ºC unos 5 minutos.
4. Se
pone la varilla de acero.
5. Una
vez atemperado, se coloca en la celda medidora del coagulómetro.
6. Se
realiza con el programa "PT" porque el fibrinógeno no está calibrado.
7. Añadimos
100 µl de R1 y se pulsa ok.
8. Hacer
la curva con los datos de la tabla.
9. Interpolar
los resultados del coagulómetro a la curva.
§ DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON
EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.
Si el resultado final determinado en la muestra es menor que 7 segundos, la
fibrinogenemia es muy alta, por lo que se ha de repetir la determinación, pero
partiendo de una dilución de 1/20 (100µl de muestra + 1.900µl de tampón
veronal), y el resultado nuevo se debe dividir entre 2.
Para establecer la fibrinogenemia de la muestra se ha de trazar,
previamente, en papel bi-logarítmico, una curva de referencia o de calibración.
Para ello, se anotan en el eje de ordenadas (la y) los valores en segundos del
tiempo en el que coagulan cada una de las diluciones del plasma calibrador, y
en el eje de abscisas (el horizontal) las concentraciones de fibrinógeno que
corresponden a cada una de ellas.
Posteriormente, se señalan en la gráfica los puntos y se traza la línea, en
la cual interpolamos la lectura que nos ha dado el coagulómetro.
La fibrinogenemia normal oscila entre los 150 y los 450 mg/dl.
La formación de fibrinógeno y, por tanto su concentración plasmática, puede
estar disminuida por trastornos congénitos o adquiridos.
La fibrinogenemia asciende, de una forma inespecífica, en multitud de
procesos inflamatorios, debido a que es un rectante de fase aguda.
La lectura de nuestro resultado ha sido 16,8, que interpolado a la curva,
nos da una actividad del 80% más o menos.
Para hacer la curva hemos cogido los siguientes datos:
concentración de 79,74 --- 47 segumdos
concentracion de 239 ------ 16 segundos
concentracion de 478 ------- 11
Las otras concentraciones no las he podido coger para realizar la grafica ya que salio un resultado mucho mayor que la ultima concentracion
Para hacer la curva hemos cogido los siguientes datos:
concentración de 79,74 --- 47 segumdos
concentracion de 239 ------ 16 segundos
concentracion de 478 ------- 11
Las otras concentraciones no las he podido coger para realizar la grafica ya que salio un resultado mucho mayor que la ultima concentracion
§ APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.
Lo más correcto es determinar tres veces el tiempo en el que coagulan la
muestra y las diluciones del plasma calibrador, y dar, como resultado final, la
cifra media calculada a partir del trío de valores.
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
CONTROL NORMAL REF: 1709104
CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se
debe revisar el instrumento, los reactivos o la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
§ NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES
ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio.
2. Llevar
el pelo recogido si se tiene largo.
3. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
4. Uso
correcto del coagulómetro.
5. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
§ CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.
Las cubetas y el material utilizado
se pueden lavar con normalidad.
§ OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
El Fibrinógeno (Factor I), proteína
sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar
el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los
mecanismos de coagulación.
La concentración de fibrinógeno se
incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan
valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas,
disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y
pancreatitis1.
El diagnóstico clínico debe
realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
Hoja de trabajo
Hoja de trabajo
1º ¿De qué tipo es la
determinación de fibrinógeno realizada en esta práctica?
Es una determinación cronométrica.
2º ¿A qué concentración está la
trombina bovina?
Está una concentración de 100 U NIH/ml
3º ¿A qué dilución se somete a la
muestra?
A una dilución de 1/5
4º. ¿Cuál es la fibrinogenemia
normal?
La fibrinogenemia normal oscila entre los 150 y los
450 mg/dl 
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