Tiempo de protrombina (TP) (05-03-15)

§  JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).

El tiempo de protrombina (PT), es el tiempo que tarda en coagular un PPP cuando se pone en contacto con un exceso de calcio y de tromboplastina hística.

El reactivo utilizado, para la realización de esta prueba, es una mezcla de tromboplastina hística (TH) y de calcio, por lo que recibe el nombre de tromboplastina cálcica.

La TH procede de extractos de cerebro o de pulmón, de hombre o de animales (generalmente, de conejo o de vaca).

§  IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.

La muestra en esta práctica es un plasma pobre en plaquetas (PPP), correctamente preparado.

§  MATERIAL UTILIZADO.

MATERIAL ADICIONAL

-          Tubo de ensayo de plástico.

- Gradilla.

- Cubetas de coagulómetro.

- Varilla para coagulómetro.

- Rotulador de vidrio.

- Pipeta automática de 100 µl y 200 µl.

- Puntas de pipetas.

- Coagulómetro.

- Papel  de fieltro.

- Bata y guantes.

REACTIVOS

Una tromboplastina cálcica.

La sensibilidad de todas las TH comerciales se compara con una TH de referencia internacional y se expresa en forma de un índice de Sensibilidad Internacional (ISI). Cuanto menor es el ISI de la TH comercial, mayor es su sensibilidad.

El ISI de cada reactivo de tromboplastina cálcica comercial puede ser diferente y, además, puede variar de un lote a otro. Por lo que debe de mirarse en el folleto de instrucciones que se adjunta en el envase.

REACTIVOS R	Tromboplastina calcica liofilizada, extracto de acetona dehidratada de cerebro de conejo y CaCl2. Tampón y conservantes.
Opcional	CONTROL NORMAL REF: 1709104 CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106

 

§  SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).

1.      Reconstituir los reactivos.

a.       Ref. 1709222-1709224-1709225 Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir el contenido de un vial R con 4,0 ml de agua destilada.

b.      Ref. 1709223. Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir el contenido de un vial R con 2,0 ml de agua destilada.

c.       Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Evitar la formación de espuma. Incubar 15 min. a temperatura ambiente, antes de su uso.

2.       Depositar el volumen total de la tromboplastina cálcica, que es necesaria, en un tubo de ensayo rotulado correctamente.

3.      Atemperar la tromboplastina cálcica a 37º C durante 5 minutos.

4.      Rotular las cubetas con las letras M y C.

5.      Verter 100 µl de PPP problema en el interior de la cubeta y atemperar a 37º C.

6.      Colocar la cubeta en la celda de medida del coagulómetro y agregar 200 µl de tromboplastina cálcica.

7.      Automáticamente, se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comienza la lectura de éste.

Cuando se forma el coágulo, el coagulómetro finaliza la lectura y nos ofrece en su pantalla el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica.

§  DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.

El TP es el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica hasta la formación del coágulo de fibrina.

El resultado también puede expresarse en forma de porcentaje de actividad de la protrombina. Para ello, el valor en segundos del TP determinado en la muestra se interpola en la curva de actividad de la protrombina, previamente preparada, y se halla el porcentaje de actividad de la protrombina que le corresponde a éste.

Además, el resultado puede expresarse en forma de cociente o proporción (ratio) entre el valor, en segundos, del TP de la muestra y el de un plasma control no diluido ( el de 100% de actividad)

Este cociente puede ser corregido con el ISI de la tromboplastina hística, en este caso se denomina INR y se calcula con la siguiente fórmula:

Los valores de TP están comprendidos, normalmente, entre 11 y los 15 segundos.

El porcentaje de actividad de la protrombina de un plasma normal oscila, habitualmente, entre el 70 y el 100%.

La ratio de protrombina normal está comprendida entre 0,9 y 1,15.

El tiempo de protrombina está alargado, el porcentaje de actividad de la protrombina está disminuido y la ratio de protrombina está aumentada, en pacientes:

·         Con déficits de factores de la vía intrínseca.

·         Sometidos a terapias con dicumarinas.

·         Con algún trastorno hepático.

Los valores que se han obtenido con la práctica son:

	Segundos	Porcentaje	Ratio	I
Muestra	24,9 sg	33,2 %	2,02	2,31
Control	16,8 sg	59 %	1,37	1,45

Este resultado lo interpolamos a la tabla y nos da un valor de un porcentaje al 50 % y 19 seg, por lo que el resultado, según los valores normales, está alargado, por lo que la muestra puede pertenecer a algún paciente con alguna de las patologías antes descritas.

§  APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.

Lo más correcto es determinar dos veces el TP de la muestra y dar, como resultado final, la cifra media calculada a partir de cada par de valores.

Los resultados dependen de múltiples factores como el instrumento, la técnica y el reactivo usado

§  NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.

1.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.

2.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.

3.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.

4.      Uso correcto del coagulómetro.

5.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.

§  CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.

Los reactivos utilizados, al no ser clasificados como preparado peligrosos, se pueden desechar por el fregador y limpiar con normalidad el material utilizado sin dejar resto de jabón.

§  OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.

Los factores extrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado. El proceso de medición del tiempo de protrombina en una etapa única, mide el tiempo de coagulación del plasma después de la adición del reactivo.

Desde su descripción por Quick en 1935, el Tiempo de Protrombina (PT) o Tiempo de Quick ha servido para determinar trastornos de la coagulación, la PT es la determinación más frecuente junto con la APTT.

La PT es sensible a las anomalías de los factores extrínsecos de la coagulación (Factor II, V, VII, X y fibrinógeno), así como sus inhibidores. Es, además, un indicador de enfermedades hepáticas.

Se utiliza frecuentemente para la monitorización de las terapias con anticoagulantes1, 2, 3.

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Hoja de trabajo

1º ¿Qué índice expresa la sensibilidad de una tromboplastina hística?

Se expresa con el ISI (Índice de Sensibilidad Internacional). Cuanto menor es el ISI de la TH comercial, más sensible es.

2º ¿Cómo se llama la ratio de protrombina corregida?

Se llama INR.

3º ¿Cuál es el % normal de actividad de protrombina?

El % normal de actividad de protrombina está entre el 70 y 100%

4º. ¿En qué circunstancias se altera el TP?

Se altera en pacientes:

·         Con déficits de factores de la vía intrínseca.

·         Sometidos a terapias con dicumarinas.

·         Con algún trastorno hepático.