Curva de actividad de la protrombina (05-03-15)

§  JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).

Los resultados de una determinación del tiempo de protrombina (TP) pueden expresarse en forma de porcentaje de actividad (Índice de Quick).

Para ello es necesario haber preparado previamente una curva de actividad de la protrombina y, después, interpolar en la gráfica trazada el valor determinado en el plasma problema.

Para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una batería de diluciones, a partir de un plasma control normal y se mide el TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las diluciones preparadas.

A continuación, se asigna el 100 % de actividad al número de segundos medios en la determinación del TP del plasma control normal puro y se calcula el porcentaje que, proporcionalmente, les corresponde a los valores de TP determinados en cada una de las diluciones de éste.

Con todos los datos, se traza una curva de calibrado (curva de actividad de la protrombina), anotando, en el eje de ordenadas los valores en segundos, del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones y. en el eje de abscisas, el % de actividad asignado a cada uno de ellos.

§  IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.

La muestra en esta práctica es una batería de plasma diluido a partir de un plasma normal control

§  MATERIAL UTILIZADO.

MATERIAL ADICIONAL

-   Tubos de ensayo.

-   Gradilla. Rotulador de vidrio.

-   Micropipeta de varias unidades.

-   Vaso de precipitado.

-   Cubetas de coagulómetro.

-   Baritas de acero.

-   Coagulómetro

-   Papel de Gráfica de TP

-   Regla.

-   Reloj.

-   Puntas de pipeta.

REACTIVOS

·         Solución salina al 0,85%

·         Tomboplastina cálcica.

·         Pool de plasma normales o un plasma normal control., a partir del cual se va a preparar la batería de diluciones.

Pool de plasmas o Plasma control	200	200	200	200	200
Solución salina al 0,85%	0	200	400	600	1.800
Dilución	1/1	1/2	1/3	1/4	1/10
% de actividad	100	50	33	25	10

Los tubos han de ser rotulados con la cuantía de la dilución que contienen o con el porcentaje de actividad asignado a cada dilución.

§  SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).

1.      Homogeneizar la tromboplastina cálcica y las diluciones de plasma, sin agitarlas bruscamente.

2.      Rotulas los tubos.

3.      Depositar el volumen total de tromboplastina cálcica que se va a necesitar en un tubo de ensayo de plástico, adecuadamente rotulado.

4.      Atemperar a 37º C en el coagulómetro  unos 5 minutos.

5.      Introducir la barita de acero.

6.      Verter 100 µl de plasma puro y de cada una de sus diluciones en las cubetas correspondientes e incubar 5 minutos.

7.      Colocar, sucesivamente, cada una de las cubetas en la celda de medida del coagulómetro y agregar 200 µl de tromboplastina cálcica.

8.      Automáticamente se pone en marcha el magnetoagitador y comienza la lectura.

9.      Cuando se forma el coágulo, el coagulómetro finaliza la lectura.

10.  Anotar los resultados

§  DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.

El tiempo de protrombina es el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica hasta la formación del coágulo de fibrina.

Para construir una curva de actividad de la protrombina hay que trazar una curva de calibrado o referencia en un papel milimetrado. Para ello, se anotan, en el eje de ordenadas (de la y) los valores en segundos, de TP de plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones; y en el eje de abscisas (la x) el % de actividad asignado a cada uno de ellos.

Después, en la gráfica, se señalan los puntos que confluyen cada uno de los valores dados con su % de actividad. Una vez señalados, se traza la lía, formándose una curva, si se hace en papel milimetrado.
Los resultados obtenidos han sido 

% de actividad	Segundos
10	103
25	57
33	54
50	33
100	5

§  APLICACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD.

Lo más correcto es determinar 3 veces el TP del plasma control puro y de cada una de sus diluciones, y dar, como resultado final, la cifra media calculada a partir de cada trío de valores.

§  NORMAS DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.

1.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.

2.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.

3.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.

4.      Uso correcto de la centrifugadora.

5.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.

6.      Desechar la jeringuilla y la aguja usadas en la extracción de sangre en su contenedor correspondiente.

§  CUIDADO DEL MEDIOAMBIENTE.

Dado que las cantidades de reactivo son pequeñas, se puede lavar el material en el fregador. Las baritas de acer y las cubetas no se desechan.

§  OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.

El tiempo de protrombina (PT, por sus siglas en inglés) es un análisis de sangre que mide cuánto tarda la sangre en coagular. Se puede utilizar para verificar problemas de hemorragia. También se utiliza para comprobar si está funcionando un medicamento para prevenir coágulos de sangre.

La prueba PT también puede llamarse prueba de INR. El INR (índice internacional normalizado) es un modo de estandarizar los resultados de pruebas de tiempo de protrombina, sin importar el método usado. De esta forma, el médico puede entender los resultados del mismo modo aun cuando provengan de laboratorios y métodos de prueba diferentes. En algunos laboratorios, solo se reporta el INR; no se reporta el PT.

Los factores de coagulación de la sangre son necesarios para la coagulación. La protrombina, o factor II, es uno de los factores de coagulación producidos por el hígado. La vitamina K es necesaria para producir protrombina y otros factores de coagulación. El tiempo de protrombina es una prueba importante porque verifica si cinco diferentes factores de coagulación de la sangre (factores I, II, V, VII y X) están presentes. El tiempo de protrombina se prolonga por:

-        Los anticoagulantes, como warfarina.

-        Niveles bajos de factores de coagulación de la sangre.

-        Un cambio en la actividad de cualquiera de los factores de coagulación.

-        La ausencia de cualquiera de los factores de coagulación.

-        Otras sustancias, llamadas inhibidores, que afectan a los factores de coagulación.

-        Un aumento en el uso de los factores de coagulación.

-        Un tiempo de protrombina anormal suele ser causado por una enfermedad o una lesión del hígado, o por el tratamiento con anticoagulantes.

Otra prueba de la coagulación de la sangre, llamada tiempo de tromboplastina parcial (PTT, por sus siglas en inglés), podría usarse si usted toma otro tipo de anticoagulante llamado heparina. Esta prueba mide otros factores de coagulación. El tiempo de tromboplastina parcial y el tiempo de protrombina suelen realizarse al mismo tiempo para controlar problemas de hemorragia o la posibilidad de demasiada hemorragia en la cirugía.

Hoja de trabajo

1º ¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal?

Se diluye con una solución salina al 0,85%

2º ¿Con qué porcentaje de actividad se asigna a la dilución del plasma control de 1/2?

Con el 50%

3º ¿Cuándo se pone en marcha el coagulómetro?

Cuando se agrega la tromboplastina cálcica

4º. ¿Qué se anota en el eje de ordenadas?

Se anotan los valores en segundos.