jueves, 11 de diciembre de 2014

Tinción de Wright (13 de Noviembre de 2014)

Justificación de la técnica y metodología utilizada
El colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de azul de etileno y azur B junto con otros derivados del alcohol metílico. Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración

Identificación de la muestra y de los controles efectuados
Sangre capilar

Material utilizado
El material que he utilizado para hacer la practica es el siguiente:
  • Lancetas
  • Gasas
  • Puente de tinción
  • Cristalizador
  • Portaobjetos
  • Tubos de ensayo
  • Pipeta automática
Los reactivos que he utilizado son:
  • Solución de eosina - azul de metileno según Wright
  • Solución tampón pH 7,2
  • Aceite de inmersión
  • Alcohol
La muestra utilizada es:
  • Sangre
Secuenciación y procedimiento seguido
  1. Realizar un frotis sanguíneo muy fino
  2. Sobre la extensión colocada en el puente de tinción verter 1 ml de Wright. Dejamos actuar un minuto y lavamos con solución tampón pH 7,2
  3. Diluimos 0,5 ml de Wright con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2. Cubrimos la extensión con esta dilución y la dejamos actuar durante 3 - 5 minutos
  4. Lavamos con agua del grifo y lavamos una segunda vez con tampón pH 7,2
Descripción y registro de los resultados obtenidos
Las células se observan coloreadas parecidas a la tinción de Giemsa, los glóbulos blancos se tiñen y se pueden diferenciar sus distintas clases.

 
 
 
 
Aplicación del control de calidad

En esta práctica debemos tener especial cuidado en las extensiones y en las observaciones de la muestra en el microscopio.
En cuanto a las extensiones, debemos tener suficiente formación ya que somos nosotros los que, en un futuro, tendremos que validar la calidad de los extendidos, la coloración, etc.
En la observación al microscopio de la muestra, esta debemos realizarla en varios microscopios para compararla y poder validarla. Debemos comprobar el buen funcionamiento de cada uno de los microscopios que se utilicen y manejarlos correctamente, siguiendo el protocolo de utilización.
También debemos respetar los tiempos de secado y de tinción, ya que, de estos va a depender que las células se tiñan lo suficiente para su observación.

Normas de prevención de riesgos laborales
Las normas de prevención que debemos adoptar en esta práctica son:
-        Uso de bata y de guantes apropiados.
-        Si se tiene el pelo largo, llevarlo recogido.
-        Lavarse las manos antes y después de la práctica.
-        En caso de formarse polvo, usar equipo respiratorio adecuado.
-        Los envases hay que dejarlos bien cerrados, guardados en un ambiente seco y a temperatura
          ambiente.
-        En caso de vertido accidental, recoger en seco y depositar en contenedores de residuos para su
          posterior eliminación de acuerdo con las normativas vigentes. Limpiar los restos con agua
          abundante.
-        Desechar las lancetas, los capilares y los colorantes sobrantes en sus correspondientes
          contenedores.
-        Lavar y desinfectar adecuadamente los portaobjetos y los tubos de ensayo.
-        Mantener el puesto de trabajo limpio y ordenado.

Cuidado del medio ambiente
Puesto que el colorante de Wright resulta tóxico, hay que desechar el sobrante de la práctica en la garrafa destinada para desechos tóxicos que después será eliminada según la normativa vigente.
Los portas y los tubos se pueden lavar como siempre en el fregador.

Observaciones, comentarios y conclusiones
Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y
favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.

Hoja de trabajo
1. ¿Qué tipo de colorante utilizamos en esta tinción?
Eosina y azul de metileno

2. ¿Qué sustancia empleamos como fijador?
Ninguna 

3. ¿Cuánto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante?
De 3 a 5 minutos


 

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