Prueba cruzada mayor (21-05-15)

Justificación y metodología utilizada

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante, primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso y por ultimo frente al suero antiglobulina de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria

Identificación de la muestra y de los controles efectuados

Suspensión de hematíes al 5%

Material

• Tubos de centrifuga
• Centrifuga
• Baño de agua
• Pipeta Pasteur
• Gradilla
• Reloj
• Vasos de precipitados

Reactivos

• Suero fisiológico
• Albumina bovina al 30%
• Suero antiglobulina de Coombs

Secuenciación y procedimiento seguido

1. Hacer un lavado de hematíes y una suspensión al 5%
2. En un tubo de centrifuga depositas una gota de suspensión del donante y dos gotas del suero del receptor
3. Mezclamos y dejamos a temperatura ambiente 2-3 minutos
4. Centrifugamos a 3000 rpm durante 1 minuto
5. Leemos el resultado obtenido en medio salino
6. Añadimos al tubo 3 gotas de albumina bovina al 30 %
7. Mezclamos e incubamos a 37ºC durante 30 minutos 
8. Centrifugamos a 3000 rpm durante 1 minuto
9. Leemos el resultado obtenido en medio albuminoso
10. Lavamos tres veces los hematíes con suero fisiológico para eliminar los anticuerpos que no se hayan fijado a los eritrocitos. Retiramos todo el sobrenadante posible del ultimo lavado 
11. Añadimos al tubo una gota de suero antiglobulina humana de Coombs y mezclamos bien
12. Centrifugamos a 1000 rpm durante dos minutos
13. Leemos los resultados, si no aglutina se puede hacer la trasfusión

Descripción y registro de los resultados obtenidos

La lectura de los resultados se realiza resuspendiendo el botón hematico con suavidad después de cada una de las cenrifugaciones.
La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangres son compatibles y, por tanto, la trasfusión es posible
La aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad
Si se observa hemolisis en cualquiera de los pasos, también es signo de imcompatibilidad
Resultado: No me ha aglutinado en ninguno de los pasos por lo tanto la trasfusión seria posible

Aplicaciones del control de calidad

El lavado inadecuado de los hematíes, la contaminación de los reactivos con trazas de suero, tiempos de incubación y centrifugado incorrectos, mal control de la temperatura e inadecuada conservación u omisión de los reactivos dan reacciones negativas falsas.

Normas de prevención de riesgos laborales

1.      Uso de guantes y bata en el laboratorio.

2.      Llevar el pelo recogido si se tiene largo.

3.      No comer, beber o fumar en el laboratorio.

4.      Uso correcto de la centrifuga y baño de agua.

5.      Lugar de trabajo limpio y ordenado.

Cuidado del medioambiente

El material utilizado en esta práctica se puede lavar en el fregador ya que los reactivos utilizados son de poca cantidad.

Los frascos hay que volver a dejarlos en su lugar, en el frigorífico del laboratorio, bien cerrados. 

Observaciones, comentarios y conclusiones

En esta práctica hay que tener especial atención en seguir los pasos correctamente y en mover los reactivos para que no de un falso positivo o un falso negativo.

Hoja de trabajo

1. ¿Que se enfrenta en la prueba cruzada mayor?
   Se enfrenta sangre y suero
2. ¿Cuando se debe realizar la prueba cruzada mayor?
   Cuando se necesita hacer una trasfusión
3. ¿Por que debemos realizar la prueba en medio salino y albumina?
   Para detectar todos los anticuerpos presentes
4. ¿Que pone de manifiesto el suero antiglobulina humana de Coombs?
   Detectamos los anticuerpos que se hayan fijado a la membrana eritrocitaria