JUSTIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).
La
determinación celular del grupo ABO (sistema sanguíneo cuyo nombre proviene de los tres tipos de
grupos que se identifican: los de antígeno A, de antígeno B, y "O"),
puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo.
En ambos casos, los hematíes problema, que
contienen sustancias antigénicas (aglutinógenos) del sistema ABO, se enfrentan
con antisueros ( aglutininas) dirigidos contra esos antígenos.
El resultado final de esta determinación,
consiste en la aglutinación directa de los eritrocitos cuando reaccionan contra
el antisuero que les corresponde.
Para estos estudios in vitro se utilizan
anticuerpos anti-A, anti-B y anti AB procedentes de donantes u obtenidos
mediante síntesis con hibridomas de linfocitos sensibilizados y células de
mieloma múltiple (Ac monoclonales) Sin embargo, como aglutininas anti-A1
o anti-H se utilizan Lectinas.
Las lectinas o fitoaglutininas son proteínas
presentes en algunas plantas, sobretodo en sus semillas, capaces de aglutinar a
los hematíes humanos. Una de ellas, extraída de la leguminosa Ulex europaeus
(Tojo), es capaz de aglutinar específicamente a los hematíes que contienen sustancia
H, y también es eficaz para detectar esta sustancia en la saliva, por lo que se
utiliza para identificar a los individuos secretores. El extracto de la semilla
de la leguminosa Dolichos biflorus, puede aglutinar a los hematíes A1,
A1B y no aglutina a los hematíes A2, A2B, B y
O.
Es importante mencionar que todas estas
determinaciones deben hacerse a temperatura ambiente, ya que la aplicación de
calor puede afectar a los hematíes impidiendo observar una posible
aglutinación.
Por tanto, esta técnica consiste en la
observación de la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de
antisueros conocidos para determinar el
grupo AO de un individuo.
IDENTIFICACIÓN
DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es sangre
capilar, pero también puede ser sangre total anticoagulada, citratada u
oxalatada.
MATERIAL
UTILIZADO.
MATERIAL ADICIONAL
-
Capilares
-
Gasas
o algodón
-
Lanceta
-
Porta
objeto
-
Rotulador
de vidrio
-
Palillos
- Papel
de filtro
- Lámpara
REACTIVOS
-
Suero
anti-A
-
Suero
anti-B
-
Alcohol
SECUENCIACIÓN
Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1.
Dividir un
portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio. Marcar con la letra A
y otro con la letra B.
2.
Depositar una
gota de suero anti-A (azul) en la sección A del portaobjetos, y una gota del
suero anti-B (amarillo) en la sección B.
3.
Situar una
pequeña gota de sangre (aproximadamente la mitad del volumen usado de
antisuero) junto a la gota de antisuero.
4.
Mezclar ambas
gotas en cada sección utilizando un palillo distinto en cada una de ellas y
formando un círculo de 2 a
2,5 cm
de diámetro.
5.
Hacer oscilar
suavemente el portaobjetos hacia delante y hacia atrás, durante dos minutos.
6.
Observar la
presencia o ausencia de aglutinación.
DESCRIPCIÓN
Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE
LOS MISMO RESULTADOS.
Hay aglutinación cuando aparecen grumos
rojos que flotan en un líquido claro en el portaobjetos. En caso contrario, los
hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.
La presencia o ausencia de aglutinación
puede confirmarse mediante examen microscópico de las mezclas.
En general estas pruebas son muy eficaces
ya que la presencia de plasma en la muestra aumenta la velocidad de la reacción
y el tamaño de los grumos. El resultado puede observarse en unos segundos,
aunque conviene reexaminar la reacción del anti-A al cabo de dos minutos para
comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil. Éstas suelen ocurrir
en menos de un 1% de las muestras analizadas.
El grupo eritrocitario que se le asignará,
atendiendo a los resultados obtenidos, se puede ver en el cuadro siguiente:
Hematíes y suero anti-A
|
Hematíes y suero anti-B
|
Grupo eritrocitario
|
+
|
-
|
A
|
-
|
+
|
B
|
+
|
+
|
AB
|
-
|
-
|
0
|
+ = presencia de aglutinación
-
= ausencia de
aglutinación
Esperamos 2 minutos antes de dar el
resultado de la prueba.
·
Aglutinación positiva: aparición de grumos rojos sobre un fondo
claro. No deben confundirse con pequeños coágulos de fibrina presentes en la
muestra.
·
Aglutinación negativa: la mezcla da lugar a una suspensión
homogénea de los hematíes. La mezcla de sangre con albúmina bovina debe dar
siempre aglutinación negativa. En caso de no ser así, no podemos informar del
resultado de la prueba.
El resultado que he obtenido es que no ha habido aglutinación en ninguna
prate del portaobjetos por lo tanto el grupo sanguíneo es 0
Esta es la grafica de los grupos sanguineos de todos los de la clase:
APLICACIÓN
DEL CONTROL DE CALIDAD.
Antes de realizar la mezcla, ha de haber
una gota de sangre, aproximadamente la mitad de la gota de antisuero.
La determinación ha de hacerse a
temperatura ambiente, ya que el calor puede afectar a los hematíes, impidiendo
así la observación de una posible aglutinación.
NORMAS DE
SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio.
2. Llevar
el pelo recogido si se tiene largo.
3. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
4. Uso
correcto de la centrifugadora.
5. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
6. Desechar
la lanceta en el contenedor amarillo y el algodón en el contenedor destinado a
residuos orgánicos.
CUIDADO
DEL MEDIOAMBIENTE.
Los
antisueros han de guardarse correctamente e identificados en el frigorífico
tras finalizar la práctica.
Los portaobjetos se pueden lavar con normalidad en el fregador.
Los portaobjetos se pueden lavar con normalidad en el fregador.
OBSERVACIONES,
COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
En
el caso de que el grupo obtenido sea el A, los hematíes problema deberán ser
ensayados de nuevo con Lectina anti-A1, de forma que si se produce
aglutinación, el sujeto pertenecerá al subgrupo A1.
Hoja de trabajo
1º ¿ Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?
Se utiliza la técnica de la observación directa en porta.
Para esta práctica se utiliza sangre capilar, aunque también se puede utilizar
sangre total anticoagulada, con citrato y oxalato
Se observa la aparición de grumos rojos sobre un fondo claro. No deben
confundirse con pequeños coágulos de fibrina presentes en la muestra.
En el
caso de que el grupo obtenido sea el A, los hematíes problema deberán ser
ensayados de nuevo con lectina anti-A1, de forma que si se produce
aglutinación, el sujeto pertenecerá al subgrupo A1.
No hay comentarios:
Publicar un comentario