JUSTIFICACIÓN
DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA (FUNDAMENTO).
El
fundamento de esta práctica es la misma que la práctica XXIX:
"Determinación celular en porta", pero en esta ocasión se realiza en
tubos.
Los
hematíes problema, contienen las sustancias antigénicas del sistema ABO y se
enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.
El
resultado final, como en la otra práctica, es la presencia o no de aglutinación
en los hematíes reaccionantes.
IDENTIFICACIÓN
DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es de sangre total anticoagulada suspendida al 2%.
MATERIAL
UTILIZADO.
MATERIAL ADICIONAL
-
Papel
de filtro.
-
tubos
de centrífuga.
-
Centrifuga.
-
Pipetas
Pasteur de vidrio.
-
Rotulador
de vidrio.
-
Gradilla.
-
Bata
y guantes.
-
Pipetas
-
Prepipetas
-
Micropipeta.
-
Puntas
de Pipetas
-
Vidrio
de reloj.
-
Balanza.
-
Pinzas.
-
Cucharilla.
-
Vaso
de precipitado.
-
Matraz
aforado de 100 ml.
-
Frasco
lavador.
-
Embudo
-
Parafilm
o tapones
REACTIVOS
·
Suero
anti-A
·
Suero
anti-B
·
Suero
anti-AB
·
Solución
salina fisiológica
SECUENCIACIÓN
Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1. Lavamos
los hematíes 3 veces.
-
Preparamos un tubo con 1 ml sangre y 3
ml de suero fisiológico y otro con 4 ml agua para calibrar la centrífuga y
centrifugamos durante 3 minutos a 2.500 rpm.
-
Quitamos el sobrenadante y volvemos a
echar 3 ml de suero. Volvemos a centrifugar.
2. Preparamos
una suspensión al 2%
C1
x V 1= C2 x V2
5
x V1 = 2 x 2 --> V1 = 0,8 ml
Para
la suspensión al 2%, cogeríamos 0,8 ml de la suspensión al 5% y le añadiríamos
1,2 ml de suero fisiológico. Se tapa con parafilm y se homogeneíza.
3. En
tres tubos diferentes y rotulado ponemos una gota de los hematíes, preparados
en la suspensión, con dos gotas de anti-A en un tubo, dos gotas de anti-B en
otro tubo y otras dos gotas de anti-AB en el tercer tubo.
4. Centrifugamos
los tubos durante 1 minuto a 1000 rpm, con un cuarto tubo con tres gotas de agua
para calibrar la centrífuga.
DESCRIPCIÓN
Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE
LOS MISMO RESULTADOS.
Después
de centrifugar, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo para desprender el
sedimento y observar macroscópicamente la presencia o la ausencia de
aglutinación.
Reacción
negativa: los hematíes se suspenden homogéneamente.
Reacción
positiva: Se observa un botón de hematíes que permanecen
unidos una vez desprendidos el sedimento.
La interpretación clínica se hace
igual que en la técnica en porta.
El resultado es ninguna aglutinacion en ningun tubo, por lo tanto el grupo sanguineo es 0
APLICACIÓN
DEL CONTROL DE CALIDAD.
Para poder realizar un estudio correcto en esta
práctica, los hematíes han de estar bien lavados. En caso de estar el
sobrenadante coloreado, significa que ha habido hemólisis, por lo que debemos
de comenzar de nuevo con el lavado de hematíes.
Para utilizar correctamente la centrífuga, los tubos a
utilizar han de ser todos del mismo tamaño y en número par, para poder
equilibrar la centrífuga.
Seguir correctamente las indicaciones de utilización
de la centrífuga marcados en la práctica.
NORMAS
DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio.
2. Llevar
el pelo recogido si se tiene largo.
3. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
4. Uso
correcto de la centrifugadora.
5. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
CUIDADO
DEL MEDIOAMBIENTE.
Dado
que las cantidades de los reactivos utilizados son muy pequeñas, los tubos
utilizados se lavan con normalidad en el fregador.
OBSERVACIONES,
COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
En
el momento de interpretar los datos, hay que destacar que los restos de
detergente o sustancias extrañas en los tubos, pueden ocasionar falsos
positivos
Además, se pueden dar casos de falsos positivos por
dos motivos:
-
Aglutinación no específica, debido a la
presencia de ácido hialurónico en la sangre, procedente de la gelatina de
Wharton del cordón umbilical. Se elimina añadiendo una gota de hialuronidasa a
la suspensión de hematíes.
-
Fenómeno de Rouleaux: Consiste en una
agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de
monedas. Las sustancias que más frecuentemente originan este fenómeno son el
fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.
Estos fenómenos se pueden evitar
con el lavado previo de los hematíes problema.
Hoja
de trabajo
1º ¿Qué tipo de técnica inmunológica se
emplea en este análisis?
Se emplea la técnica en tubo.
2º ¿A qué concentración se prepara la
suspensión de hematíes problemas?
Se prepara al 2%, para lo que se mezclan 4,9 ml de suero fisiológico con
0,1 de hematíes lavados.
3º ¿Cómo se ve la aglutinación positiva?
La aglutinación positiva es cuando los hematíes resuspenden
homogéneamente.
4º. ¿Cómo se pueden evitar los falsos
positivos?
Los
falsos positivos que se pueden dar son:
-
Aglutinación
no específica, debido a la presencia de ácido hialurónico en la sangre,
procedente de la gelatina de Wharton del cordón umbilical. Se elimina añadiendo
una gota de hialuronidasa a la suspensión de hematíes.
-
Fenómeno
de Rouleaux: Consiste en una agrupación no específica de hematíes, que adoptan
una imagen de pilas de monedas. Las sustancias que más frecuentemente originan
este fenómeno son el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la
polivinilpirrolidona.
Estos
falsos positivos se pueden evitar con el lavado de los hematíes problema.
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