JUSTIFICACIÓN
DE LA TÉCNICA Y METODOLOGÍA UTILIZADA.
Tanto
para la realización en porta o en tubo, se emplean sueros anti-D que pueden ser
o salinos o albuminoideo. Estos últimos son los más utilizados y se preparan en
un medio enriquecido con albúmina.
Los
hematíes pueden revestirse in vivo de anticuerpos o proteínas plasmáticas
anormales y, en presencia de albúmina, producir una agregación que daría la
idea de una aglutinación positiva. por ello, se emplea un componente albúmina,
de manera que si aparece una aglutinación en este tubo debemos repetir la
prueba, pero usando el suero anti-D en medio salino.
Al
igual que en la prueba en portaobjetos, se intenta poner de manifiesto la
presencia de antígeno D en la superficie de los hematíes mediante su
enfrentamiento a un suero anti-D
IDENTIFICACIÓN
DE LA MUESTRA UTILIZADA Y DE LOS CONTROLES EFECTUADOS EN ESA MUESTRA.
La muestra en esta práctica es una muestra de hematíes suspendidos al 5%.
MATERIAL
UTILIZADO.
-
Papel
de filtro.
-
Bata
y guantes.
-
Centrífuga.
-
Rotulador
de vidrio.
-
Gradilla.
-
Pipetas
Pasteur de vidrio.
-
tubos
de centrífuga.
-
Parafilm
o tapones.
-
Vasos
de precipitado.
-
Pipetas
y micropipetas.
-
Puntas
de pipetas.
-
Reloj.
REACTIVOS
·
Suero
anti-D
·
Albúmina
bovina al 30 %.
·
Suero
fisiológico.
SECUENCIACIÓN
Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).
1. Lavar
los hematíes tres veces como en las prácticas anteriores, por 1 ml de hematíes
- 3 ml de suero, a 2500 rpm durante 3 minutos.
2. Preparar
la suspensión al 5% de los hematíes, para lo que utilizamos 0,1 ml de hematíes
lavados y 1,9 ml de suero.
3. En
dos tubos preparados, verter una gota del suspensión en cada uno y una gota de
suero anti-D en un tubo y otra gota de albúmina en el otro tubo.
4. Centrifugar
la preparación durante 1 minuto a 1000 rpm.
5. Golpear
suavemente cuando termine de centrifugar.
DESCRIPCIÓN
Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE
LOS MISMO RESULTADOS.
Se considera aglutinación positiva si se
forman grumos de color rojo en un líquido claro. Si, por el contrario, se
resuspenden de forma homogénea los hematíes, decimos que la aglutinación es
negativa.
El tubo con albúmina es un control
negativo y debe dar siempre ausencia de aglutinación. En caso de no ser así el
resultado de la prueba no es válido.
Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, decimos que el paciente
es Rh positivo.
Si no se produce aglutinación en ninguno
de los dos tubos se procede a incubar a 37 ºC durante una media hora y después
se centrifuga a 1000 rpm durante un minuto y observamos si existe aglutinación.
Si persiste la negatividad, se comprueba
que el paciente no posee un D débil o Du, mediante la prueba de Coombs
indirecta.
Si después de todos estos pasos, el
resultado sigue siendo la no aglutinación, se informa que el paciente es Rh
negativo.
El resultado que he obtenido ha sido aglutinacion en el tubo D por lo tanto el Rh es positivo.
APLICACIÓN
DEL CONTROL DE CALIDAD.
Si en el tubo de la albúmina da una aglutinación, no se puede dar por
válida la prueba.
Se ha de trabajar con sangre lo más fresca
posible, ya que la sangre que es muy vieja puede producir hemólisis.
Hay que seguir las indicaciones de
tiempos, temperaturas y medidas indicadas en la práctica para una buena
realización así como utilizar correctamente la centrífuga y, en caso de
utilizarlo, el baño de agua.
Comprobar que los reactivos no estén
caducados.
NORMAS
DE SEGURIDAD Y DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ESPECÍFICOS DE LA TÉCNICA.
1. Uso
de guantes y bata en el laboratorio.
2. Llevar
el pelo recogido si se tiene largo.
3. No
comer, beber o fumar en el laboratorio.
4. Uso
correcto de la centrifugadora.
5. Lugar
de trabajo limpio y ordenado.
CUIDADO
DEL MEDIOAMBIENTE.
El
material utilizado en esta práctica se puede lavar en el fregador ya que los
reactivos utilizados son de poca cantidad.
Los
frascos hay que volver a dejarlos en su lugar, en el frigorífico del
laboratorio, bien cerrados.
OBSERVACIONES,
COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.
En
los seres humanos, el grupo sanguíneo puede serA, B, AB ó 0, y
diferenciarse además en su Rh pudiendo ser éste positivo o negativo.
Un total de ocho tipos de sangre.
La información genética del grupo sanguíneo
Rh también está heredada de nuestros padres pero de una manera independiente
de los alelos del sistema ABO. Hay 2 alelos distintos por el factor Rh: se
llaman Rh+ y Rh-.
|
|
Una
persona "Rh positiva" o "Rh+" tiene por lo menos un alelo
de Rh+, pero también puede tener dos. Su genotipo puede ser Rh+/Rh+ o
Rh+/Rh-. Una persona Rh negativa o "Rh-" tiene el genotipo de
Rh-/Rh-.
|
|
Así
como el sistema ABO, la madre y el padre biológico donan uno de sus dos
alelos Rh a su hijo.
|
|
Una
madre que es Rh- solamente puede repartir un alelo Rh- a su hijo. Un padre
Rh+ puede pasar un alelo Rh- o Rh +. Esta pareja puede tener hijos del tipo
Rh+ (Rh- de la madre y Rh+ del padre) o Rh- (Rh- de la madre y del padre).
|
|
HOJA
DE TRABAJO
1º
¿Por qué utilizamos el control albúmina?
El tubo con albúmina es un control negativo y debe dar siempre
ausencia de aglutinación. Se utiliza para evitar que se produzca una falsa
aglutinación que pueda dar idea de un Rh positivo cuando nos encontramos hematíes
revestidos de anticuerpos o proteínas plasmáticas anormales.
En caso de no ser así
el resultado de la prueba no es válido.
2º
¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D?
Si no se
produce aglutinación se procede a incubar a 37 ºC durante una media hora y
después se centrifuga a 1000 rpm durante un minuto y observamos si existe
aglutinación.
Si persiste la negatividad, se comprueba que el paciente no posee
un D débil o Du, mediante la prueba de Coombs indirecta.
Si después de todos estos pasos, el resultado sigue siendo la no
aglutinación, se informa que el paciente es Rh negativo.
3º
¿Qué debemos detectar mediante un Coombs indirecto?
Con la prueba
indirecta, debemos detectar los anticuerpos incompletos libres en el suero o
poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los
hematíes.
4º.
¿Cómo se prepara la muestra problema?
La
muestra problema se prepara lavando los hematíes tres veces (1 ml de
hematíes+3ml de suero) a 2.500 rpm durante 3 minutos cada vez y, después, preparando
una suspensión al 5% (0,1 ml de hematíes lavados+1,9 ml de suero)
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